腫瘤組織是基礎醫(yī)學研究、藥物篩選與臨床分子檢測的核心樣品來源。對腫瘤組織進行高效、保質(zhì)地細化處理，是后續(xù)核酸提取、蛋白分析、基因組測序等流程的前置關(guān)鍵步驟。然而腫瘤組織對溫度變化極為敏感——研磨過程中產(chǎn)生的機械熱易導致RNA降解、蛋白質(zhì)變性失活，直接影響下游數(shù)據(jù)的可靠性。

此次實驗采用上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀，在可控低溫條件下對腫瘤組織進行研磨處理，旨在驗證冷凍研磨方案對生物大分子完整性的保護效果，同時獲取滿足RNA提取所需的樣品破碎粒度。

實驗儀器與解決方案

實驗儀器：上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀

冷凍研磨儀一種快速、高效、可控溫的研磨系統(tǒng)。在高頻擺動作用下，研磨球在研磨倉內(nèi)高速撞擊及摩擦，短時間內(nèi)完成樣品的研磨、粉碎、混合及細胞破壁，同時制冷模塊持續(xù)提供低溫環(huán)境，有效抑制研磨產(chǎn)熱對樣品的破壞。

冷凍研磨儀助力樣品前處理研磨的實驗步驟：

1. 稱取適量腫瘤組織，分裝至若干無酶離心管內(nèi)，每支離心管投入不銹鋼研磨珠，按照實驗規(guī)范加入定量 Trizol 試劑，逐一編號標記。

2. 開啟 CLN 冷凍研磨儀制冷模塊，設定預冷溫度，將裝好樣品的離心管整齊裝入金屬適配器，樣品對稱排布、配平裝載，連同適配器放入研磨倉預冷。

3. 預冷完成后，將適配器卡入 CLN 研磨儀卡槽，鎖緊固定螺母，確認制冷模塊持續(xù)運行。

4. 儀器觸屏設置運行參數(shù)，參數(shù)確認無誤后啟動設備。

5. 程序全部運行結(jié)束，待儀器完全停止振蕩后，打開設備取出離心管觀察破碎狀態(tài)。

實驗操作注意事項：

1. 離心管內(nèi)腫瘤組織 + Trizol 總體積不得超過離心管容積 1/3，

2. 金屬適配器必須對稱均衡擺放樣品。

3. Trizol 試劑具有腐蝕性與刺激性，全程佩戴一次性乳膠手套，在通風櫥內(nèi)操作。

腫瘤組織樣品前處理研磨前后實驗效果對比圖：

冷凍研磨儀對腫瘤組織樣品前處理研磨的效果圖可由上圖看出，樣品組織細化程度呈現(xiàn)均一狀，無殘留，RNA/RIN 值7.8（完整性好），組織樣品的蛋白活性保留率>90%。

實驗結(jié)果：

經(jīng) CLN 冷凍研磨儀處理后的腫瘤組織樣品，肉眼可見組織從完整塊狀變?yōu)榫鶆蛉榘咨隣钜海瑹o可見組織碎片殘留。加入 Trizol 的裂解液呈均一狀態(tài)，表明細胞已完全破壁、核酸充分釋放。

與常溫研磨對照組相比，冷凍研磨組提取的RNA完整性指數(shù)（RIN值）顯著提升，降解片段明顯減少，證明 -50°C制冷環(huán)境有效抑制了研磨過程中的核酸酶活性與熱變性。