一般研磨樹(shù)葉樹(shù)枝通常是用來(lái)提取DNA、RNA或是蛋白質(zhì)，葉綠素等色素。葉綠素的提取用于研究植物的光合作用效率或健康狀態(tài)。也有化學(xué)成分檢測(cè)，例如生物堿，有機(jī)酸，揮發(fā)性油等。在充分了解客戶的實(shí)驗(yàn)具體需求后，綜合考量實(shí)驗(yàn)的精確性、高效性等因素，本次實(shí)驗(yàn)決定選用三維離心冷凍研磨儀來(lái)完成相關(guān)操作。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>對(duì)樹(shù)葉樹(shù)枝進(jìn)行研磨提取植物RNA用于后續(xù)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序?qū)嶒?yàn)。
工作原理：樣品通三維高速振蕩研磨樣品。
實(shí)驗(yàn)設(shè)備：凈信三維離心冷凍研磨儀主機(jī)，研磨管、適配器。
冷凍研磨儀
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
樣品研磨實(shí)驗(yàn)步驟：
1.樹(shù)葉剪成1-2mm2的小塊，放入研磨管中。加入適量TRIzol試劑
2.提前15分鐘打開(kāi)設(shè)，啟動(dòng)儀器和制冷開(kāi)關(guān)。確保樣品在低溫中進(jìn)行。
3.設(shè)置參數(shù)18m/S，時(shí)間60S，間隔時(shí)間20S，研磨2次
4.研磨完成取出研磨管，室溫靜置3分鐘。
RNA提取操作：
1.每TRIzol試劑加入0.2 mL氯仿,迅速蓋緊管蓋，用手劇烈振蕩。室溫靜置2-3分鐘，使混合物分層。
2.將研磨管放入離心機(jī)，設(shè)置離心參數(shù)4,000 × g，離心15分鐘（4°C條件下）。
3.離心后，混合物分為三層：上層：無(wú)色水相（含RNA）。中間層：白色蛋白相。下層：紅色有機(jī)相（含DNA和蛋白質(zhì)）
RNA沉淀：
1、小心吸取上層水相，轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中。
2、加入等體積異丙醇，輕輕顛倒混勻。室溫靜置10分鐘，使RNA沉淀。
3、4°C條件下，12,000 × g離心10分鐘，棄上清。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
樹(shù)枝樹(shù)葉研磨前后效果對(duì)比圖
本次實(shí)驗(yàn)采用三維離心冷凍研磨儀處理凍干后的樹(shù)枝樹(shù)葉效果非常好，可以批量、高效，均一處理樣品，樣品處理好可以直接進(jìn)入下一步驟，方便快捷。
